人表皮角質(zhì)形成細胞取物培養(yǎng)

注意事項：
. 接收到人表皮角質(zhì)形成細胞取物培養(yǎng)，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

公司向您人表皮角質(zhì)形成細胞取物培養(yǎng)的詳細說明：了解更多原代細胞提取物點擊進

人表皮角質(zhì)形成細胞取物【Human Skin: Normal Epidermal KeratinocytesDerivatives】
     人表皮角質(zhì)形成細胞取物培養(yǎng)人表皮角質(zhì)形成細胞提取物是從人原代表皮角質(zhì)形成細胞提取的，人原代表皮角質(zhì)形成細胞從正常人表皮角質(zhì)形成組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。?

ICOS Ligand / B7-H2 抗體 (FITC), 鼠單抗 FCM    25 Test

GBA3 抗體, 鼠單抗 FCM   IF   ICC/IF   50 µg

HER2 / ErbB2 / CD340 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

MYC 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

TRAIL R / CD26 / TNFRSF0A 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

CD3 / PECAM- 抗體, 兔單抗 IF   ICC/IF    50 µg

ACOT2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

4-3-3 sigma / Stratifin / YWHAS / SFN 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

PHA2 / glycoprotein hormone alpha 2 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

DBH / Dopamine beta-Hydroxylase 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

人表皮角質(zhì)形成細胞取物培養(yǎng)SABC(小鼠/兔IgG)-FITC kit 00-200T  盒

透析袋 扁寬8 截留分子量5000 0.5m/即用型  管

維生素   

Potassium 7-hydroxynaphthalene--sulfonate 2-萘酚-8-磺酸鉀 30252-40-5  00mg

His標簽純化樹脂(50%漿料) 5ml  瓶

Ginsenoside Rh 人參皂苷Rh 63223-86-9  20mg

5-HTP-5-Hydroxytryptophan 5-羥基 56-69-9  20mg

FN纖粘連蛋白(來源人血) 0.2mg/ml  支

Lentinan 香菇多糖 37339-90-5  20mg

Cynarin ,3-二咖啡酰奎寧酸-洋薊素 82-34-9  20mg

Icariin 羊藿苷 489-32-7  20mg

培養(yǎng)步驟：
人表皮角質(zhì)形成細胞取物培養(yǎng)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。