人臍動脈平滑肌細胞提取物培養(yǎng)

人臍動脈平滑肌細胞提取物【Human Umbilical Cord：Normal Umbilical Cord Aortic Smooth Muscle Cell Derivatives】
  人臍動脈平滑肌細胞提取物培養(yǎng)人臍動脈平滑肌細胞提取物是從人臍動脈平滑肌細胞提取的，人臍動脈平滑肌細胞從正常人臍動脈組織制備。正常人臍動脈組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證產品的質量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜

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注意事項：
. 接收到人臍動脈平滑肌細胞提取物培養(yǎng)，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：
人臍動脈平滑肌細胞提取物培養(yǎng)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

UBASH3A 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

AMIGO2 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

PRND 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB    50 µg

FAM3C / ILEI 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

NPTN / SDFR 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   IHC-P    50 µg

XPNPEP2 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

CD3 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 抗體, 鼠單抗 FCM    50 µg

Tie2 / CD202b / TEK 抗體, 兔單抗 FCM   IF   ICC/IF   50 µg

ENTPD5 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

CLEC4D / CLECSF8 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

人臍動脈平滑肌細胞提取物培養(yǎng)4-甲-5-乙噻唑分子式：25.9英文名稱：4甲- 5 -乙噻唑：759-28-0分子量： C6H7NS

2,5-二甲呋喃分子式：96.3英文名稱：2,5- two methyl group：625-86-5分子量： C6H8O

2,3,6,7,0,-六甲氧三亞分子式：408.45英文名稱：2,3,6,7,0,- hexamethoxy Sanya benzene：808-57-分子量： C24H24O6

2-氟分子式：222英文名稱：2- fluorine iodobenzene：348-52-7分子量： C6H4FI

-氟-4-硝萘分子式：9.6英文名稱：- -4- nitro naphthalene：34-92-4分子量： C0H6FNO2

妥曲珠利砜英文名稱：Toltrazuril sulfone分子式：457.38分子量： C8H4F3N3O6S：69004-04-2

3--2-甲吡分子式：08.4英文名稱：3- amino -2- methyl pyridine：559097分子量： C6H8N2

2-溴-4-氟甲分子式：89.02英文名稱：2- -4- fluoride：422-53-3分子量： C7H6BrF

對甲磺酰分子式：86.23英文名稱：Para toluene sulfonic acid：576-35-8分子量： C7H0N2O2S；CH3C6H

,6-二甲氧萘分子式：88.22英文名稱：,6- two a：3900-49-0分子量： C2H2O2