人支氣管平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)

人支氣管平滑肌細(xì)胞提取物【Human Lung: Normal Bronchial Smooth Muscle Cell Derivatives】
  人支氣管平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)人支氣管平滑肌細(xì)胞提取物是從人原代人支氣管平滑肌細(xì)胞提取的，人原代支氣管平滑肌細(xì)胞從正常人支氣管組織制備。正常人成骨組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜

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注意事項(xiàng)：
. 接收到人支氣管平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：
人支氣管平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

FcERI / FCERA 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IF  ICC/IF    50 µg

XCL2 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

CGB5 / CG-beta 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

NLGN4X 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

GGPS / GGPPS 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

IL22RA2 / IL22BP 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

SerpinA6 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

VEGF / VEGFA / VEGF65 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µL

Ago4 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 µg

FABP3 / H-FABP 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IP    50 µg

人支氣管平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)新芒果苷英文名稱(chēng)：New mango分子式：584.48022分子量：C25H28O6：64809-67-2

溴乙酰分子式：22.95英文名稱(chēng)：Acetyl bromide：506-96-7分子量： C2H3BrO； CH3COBr

祖師麻甲素(）英文名稱(chēng)：Founder Ma Jiasu (daphnetin)分子式：78.44分子量：C9H6O4：486-35-

水楊酰分子式：52.5英文名稱(chēng)：Salicylhydrazone：936-02-7分子量： C7H8N2O2

-溴-3-(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,0,0,0-十七氟癸)分子式：603.英文名稱(chēng)：- -3- (3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,0,0,0- bromine seventeen fluorine decyl benzene)：34057-97-3分子量： C6H8BrF7

3-(4-溴)吡唑分子式：英文名稱(chēng)：3- (4-)：73387-46-9分子量： C9H7BrN2

-萘酚英文名稱(chēng)：Naphthol -分子式：44.7分子量： C0H8O：90-5-3

2,4-二硝甲分子式：82.3英文名稱(chēng)：2,4- two nitro toluene：2-4-2分子量： C7H6N2O4

2-氯-3-甲-5-氟吡分子式：45.56英文名稱(chēng)：2- -3- methyl -5-：3886-84-4分子量： C6H5ClFN

4-溴-2-氯三氟甲分子式：259.45英文名稱(chēng)：4- -2- three f：467435-07-0分子量： C7H3BrClF3