大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)

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大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒【Rat Coronary PrimaCell: Normal Coronary Artery Endothelial Cells】
     大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。其中，大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自正常大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，呈單層扁平分布。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專(zhuān)門(mén)上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至少的微血管。大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞傳3-5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。 雖然冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織機(jī)械韌性很強(qiáng)，但利用本公司試劑盒中提供的冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織分離體系來(lái)分離，EDTA/EGTA處理過(guò)的冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織能使得冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞一些功能特性發(fā)生改變，從而將冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。

本試劑盒適用于分離培養(yǎng)大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。本體系提供了佳的組織分離條件，分離單個(gè)細(xì)胞的效率是已出版文獻(xiàn)中所報(bào)道的5~6倍。此外，本體系還能保證所分離的細(xì)胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。利用的成纖維抑制體系，可以大程度地降低所培養(yǎng)的冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞中成纖維細(xì)胞的含量。 大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒適合于培養(yǎng)大鼠的冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。本試劑盒包含： （）OptiTDSTM大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞組織解離液（3×ml） （2）大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞組織處理緩沖液(00ml) （3）FibrOutTM大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞成纖維抑制劑(ml（500x）) （4）大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織洗液(5 x 00 ml) （5）大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（ml500x）及血清（5x0ml） （6）大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(5 x 00ml) （7）大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織預(yù)備液 ( x 00 ml) （8）大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
培養(yǎng)步驟：
大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

FLRT 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

Transferrin Receptor / TFRC / CD7 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

CD9 抗體, 鼠單抗 FCM   IF   ICC/IF   50 µg

Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

KIAA00 / p5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   IHC-P    50 µg

IFNGR / CD9 / IFN-gamma-R 抗體, 兔單抗 ELISA   WB    50 µg

CFHR2 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

K-Ras 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

G-CSFR / CD4 / CSF3R 抗體, 鼠單抗 IF   ICC/IF    50 µg

IFNB / IFN-beta / Interferon beta 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µL

大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)3,5-二硝-4-氯三氟甲分子式：270.55英文名稱(chēng)：3,5- two nitro -4- three f：393-75-9分子量： C7H2ClF3N2O4

R(+)-5,5'-二氯-6,6'-雙(DIPHE.PHOS)2,2'-二甲氧聯(lián)分子式：65.5英文名稱(chēng)：-5,5'(+) two (-6,6'-) 2,2' bis (DIPHE.PHOS) R two：8593-97-7分子量： C38H30Cl2O2P2

5-硝-,0-菲咯啉分子式：225.2英文名稱(chēng)：5- nitro -,0-：499-88-6分子量： C2H7N3O2

3-(三氯甲)酚乙呋喃分子式：25.2英文名稱(chēng)：3- (three) phenol ethyl：3399-73-3分子量： C8H5N

4,6-二甲氧-2-((氧羰)胺)嘧分子式：英文名稱(chēng)：4,6- two (-2-), a group of oxygen radicals, ((carbonyl group)：分子量：

2-乙甲英文名稱(chēng)：2- ethyl toluene分子式：20.2分子量： C9H2：6-4-3

藏紅T英文名稱(chēng)：Hide red T分子式：350.85分子量： C20H9ClN4：477-73-6

鍵那綠英文名稱(chēng)：Bond that green分子式：分子量：：

4-溴甲砜分子式：235.英文名稱(chēng)：4- bromo methyl sulfone：3466-32-8分子量： C7H7BrO2S

黃連提取物英文名稱(chēng)：Extract of Rhizoma分子式：分子量：：

注意事項(xiàng)：
. 接收到大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。