小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)

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小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒【Human Bone PrimacellTM：Osteblasts】
     小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)尿道是從膀胱通向體外的管道。其中，人尿道上皮細(xì)胞傳5代以上仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。 雖然尿道上皮組織機(jī)械韌性很強(qiáng)，但利用本公司試劑盒中提供的尿道上皮組織分離體系來(lái)分離，EDTA/EGTA處理過(guò)的薄的尿道上皮組織片能使得尿道上皮組織中細(xì)胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將尿道上皮細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。

本試劑盒適用于分離培養(yǎng)小鼠尿道上皮細(xì)胞。本體系提供了佳的組織分離條件，分離單個(gè)細(xì)胞的效率是已出版文獻(xiàn)中所報(bào)道的5~6倍。此外，本體系還能保證所分離的細(xì)胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。利用的成纖維抑制體系，可以大程度地降低所培養(yǎng)的尿道上皮原代細(xì)胞中成纖維細(xì)胞的含量。 小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒適合于培養(yǎng)小鼠的尿道上皮細(xì)胞。本試劑盒包含： （）OptiTDSTM小鼠尿道上皮細(xì)胞組織解離液 (3×ml) （2）小鼠尿道上皮細(xì)胞組織處理緩沖液 (00ml) （3）FibrOutTM小鼠尿道上皮細(xì)胞成纖維抑制劑(ml（500x）) （4）小鼠尿道上皮組織洗液(5 x 00 ml) （5）小鼠尿道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（ml500x）及血清（5x0ml） （6）小鼠尿道上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(5 x 00ml) （7）小鼠尿道上皮組織預(yù)備液 ( x 00 ml) （8）小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
培養(yǎng)步驟：
小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

人臍靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基人腺成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基

牛舌菌、肝色牛排菌 Fistulina hepatica釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠胰島素瘤細(xì)胞大豆慢生根瘤菌

葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）

干酪桿菌 Lactobacillus casei異常漢遜酵母 Hansenula anomala

Beta-TC-6(小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞)大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

酒假絲酵母 Candida kefyrCOS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞)

豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum皺褶假絲酵母 Candida rugosa

MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞植物桿菌 Lactobacillus plantarum

丁酸梭菌 Clostridium butylicumEBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞

小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)(S)-3-甲酸甲酯鹽酸鹽分子式：65.6798英文名稱：(S) -3- methyl piperidine hydrochloride：分子量： C6H2ClNO2

2--3-氟吡分子式：2.英文名稱：2- amino -3-：277-95-3分子量： C5H5FN2

異辛酸鉀分子式：英文名稱：Potassium potassium：3594-75-3分子量：

2,5-二羥磺酸鉀分子式：228.26英文名稱：2,5- two hydroxy benzene sulfonic acid：2799-87-分子量： C6H5KO5S

2-丁-3-(4-羥甲酰)-5-硝并呋喃分子式：339.34英文名稱：2- butyl -5- (4- hydroxy group) -3- nitrobenzene and the：4645-6-分子量： C9H7NO5

(R)--Boc-3-氨甲分子式：24.3英文名稱：(R) --Boc-3- ammonia methyl piperidine：40645-23-4分子量： CH22N2O2

十三烷分子式：260.46英文名稱：Thirteen benzene：23-02-4分子量： C9H32

N-丙咪唑分子式：08.4英文名稱：N- vinyl：340-0-2分子量： C6H8N2

,3-二亞并異吲哚啉分子式：95.23英文名稱：,3- two amino benzene and ISO：65558-69-2分子量： C2H9N3

赤蘚紅英文名稱：Erythrosine分子式：879.86分子量： C20H6I4Na2O5：568-63-8

注意事項(xiàng)：
. 接收到小鼠尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。