TSZ Elisa試劑盒能呈現(xiàn)有色化學(xué)反應(yīng)的酶，原則上均可作為符號(hào)用。但作為符號(hào)抗體用的酶應(yīng)滿意下列請(qǐng)求：
()來(lái)源便利，易于純化;
(2)比活性高，性質(zhì)安穩(wěn);
(3)ELISA試劑盒酶活性和量能
用簡(jiǎn)單辦法測(cè)定。ELISA試劑盒現(xiàn)在在免疫酶技能中常用的酶為辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和鹼性磷酸酶(AP)，其次還有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、和蘋(píng)果酸脫氫酶等。
由于辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高，安穩(wěn)，分子量小，純酶簡(jiǎn)單制備，所以zui常用。HRP廣泛散布于植物界，辣根中含量高，ELISA試劑盒它是由無(wú)色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉而成的糖蛋白，糖含量8%。HRP由多個(gè)同功酶構(gòu)成，分子量為40,000,等電點(diǎn)為PH3～9,酶催化的zui適PH因供氫體不一樣而稍有區(qū)別，但多在PH5擺布。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。ELISA試劑盒HRP的輔基和酶蛋白zui大吸收光譜分別為403nm和275nm，通常以O(shè)D403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表明酶的純度。高純度的酶RZ值應(yīng)在3.0擺布(zui高可達(dá)3.4)。RZ值越小，非酶蛋白就越多。值得注意的是，ELISA試劑盒純度并不表明酶活性，如當(dāng)酶變性后，RZ值仍可不變。
免疫符號(hào)技能是將一些既易TSZ Elisa試劑盒測(cè)定又具有高度敏感性的物質(zhì)符號(hào)到特異性抗原或抗體分子上，經(jīng)過(guò)這些符號(hào)物的增強(qiáng)放大效應(yīng)來(lái)顯示反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。常用的符號(hào)物包含熒光素、酶和放射性核素等，用這3種符號(hào)物進(jìn)行符號(hào)的ELISA試劑盒免疫檢測(cè)技能被稱為3大免疫符號(hào)技能。現(xiàn)在，運(yùn)用的免疫符號(hào)物還有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、鐵蛋白和膠體金等。
原理
辣根過(guò)氧化物酶(HorserADIsh Peroxidase, HRP)
辣根過(guò)氧化物酶 (horse radish peroxidase，簡(jiǎn)稱HRP，EC....7)是植物中研討得zui深化的一種過(guò)氧化物酶，早在20世紀(jì)30年代就有人著手從辣根中別離此酶，以后又制備出結(jié)晶。本試驗(yàn)是以辣根為質(zhì)料，經(jīng)過(guò)水的抽提，硫酸銨和丙酮分級(jí)別離，再經(jīng)鋅離子純化，透析除鹽，冰凍枯燥，便可得到高純度的辣根過(guò)氧化物酶。
辣根過(guò)氧化物酶是一種含亞鐵血紅素的蛋白質(zhì)，HRP廣泛散布于植物界，它是由無(wú)色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉而成的糖蛋白，糖含量8%。HRP由多個(gè)同功酶構(gòu)成，Mr在40000擺布，等電點(diǎn)7.2。溶于水，溶解度為5%(W/V)，溶液呈棕紅色，通明。酶催化的zui適PH因供氫體不一樣而稍有區(qū)別，但多在pH5擺布。酶溶于水和58%以下的硫酸銨溶液。HRP可溶于0.58飽和度以下的硫酸銨溶液，ELISA試劑盒而0.62飽和度以上則不溶。該酶zui適pH7.0(對(duì)愈創(chuàng)木酚為氫給體而言)。在室溫下，HRP幾周內(nèi)安穩(wěn)，加熱到63℃，在5min內(nèi)安穩(wěn)。氧化復(fù)原電勢(shì)很低，pH6.08時(shí)，E 0 =-0.2070V，pH為7.7時(shí)，E′0 =-0.2787V。HRP的輔基和酶蛋白zui大吸收光譜分別為403nm和275nm，通常以O(shè)D403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表明酶的純度。
ELISA試劑盒酶符號(hào)物包含酶符號(hào)抗原、酶符號(hào)抗體和酶符號(hào)SPA等。ELISA試劑盒酶符號(hào)物質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到免疫酶技能的成功與否，因而被稱為要害的試劑。酶符號(hào)物中zui常用的是酶符號(hào)抗體，它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)辦法銜接而成。酶符號(hào)抗體的質(zhì)量首要取決于純度好、活性強(qiáng)及親和力高的酶和抗體，其次要有杰出的制備辦法。現(xiàn)在，高質(zhì)量的酶(如辣根過(guò)氧化物酶，TSZ Elisa試劑盒國(guó)內(nèi)已有產(chǎn)品供給。高質(zhì)量的抗體則可經(jīng)過(guò)獲取純化而取得。在制備辦法上，宜選用產(chǎn)率高、ELISA試劑盒不影響物的活性和不稠濁攪擾性物質(zhì)且操作簡(jiǎn)便易行的辦法。