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    技術文章

    總結ELISA試劑盒實驗中的失誤
    點擊次數(shù):924 更新時間:2016-05-26
       .實驗人員應掌握實驗室基本操作具備基本素質(zhì)和具有一定的實踐經(jīng)驗。可以熟練使用實驗儀器、器械,善于總結和分析問題,對于實驗中出現(xiàn)的意外情況能穩(wěn)重妥善解決。
      2.在操作前必須仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書要求進行規(guī)范操作,不同批號的試劑千萬不能混用。在反復試驗確定成立后方可改進。
      3.必須嚴格控制反應時間,如果反應時間過長,酶會失有可能造成假陰性。
      4.評估試劑的實用性,試劑是否穩(wěn)定,對準確率的高低到頭重要。在使用試劑前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。
      5.使用校對過的微量移液器可以排除自然誤差,移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
      6.加樣不僅要做到快速也必須保證準確。如若加樣不準確,酶生成物的量不能確定直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣需慎重。如果加樣遲緩會出現(xiàn)誤差,如果試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。
      7.嚴格掌握顯色時間,如若顯色時間過短加入終止液反應終止后底物結合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。
      8.洗滌一定要*,如果洗板不*,酶結合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外需要注意洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能會出現(xiàn)假陽性。

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